Enzymatic Recombinase Amplification (ERA )
O sistema principal de amplificação isotérmica de recombinação foi obtido através de técnicas avançadas de design molecular e evolução dirigida, para obter enzimas altamente eficazes e um conjunto tecnológico único e patenteado de distribuição exclusiva da ERA Assays do Brasil.
Através da tecnologia ERA é possível amplificar especificamente fragmentos de DNA a uma temperatura constante entre 30-45 ℃, a partir de moléculas únicas. Tendo sua temperatura ótima próxima à do corpo humando, o processo de amplificação leva apenas 5-15 minutos isotermicamente. Sua adaptabilidade a baixa temperatura e sensibilidade trazem avanços revolucionários para detecção de ácidos nucleicos.
Mecanismo ERA
O princípio da amplificação de ácido nucleico da ERA baseia-se na formação de complexos proteína-DNA, constituídos por recombinases e iniciadores, que se associam e localizam sequências de dupla fita complementares. Essa associação promove a abertura da dupla hélice de DNA, permitindo a translocação de loci homólogos e o início da síntese de novas fitas de DNA, catalisada por proteínas de ligação a fita simples (SSBs). O processo resulta em uma amplificação exponencial da sequência alvo, rápida e exata em condições isotérmicas.
A combinação de técnicas de hibridização de sondas marcadas ou de técnicas baseadas em CRISPR/Cas permitem a detecção específica, qualitativa e quantitativa do produto de amplificação permitindo inclusive a diferenciação de SNPs. Através de nossa plataforma nossos parceiros podem ter acesso a ensaios já desenvolvidos ou ter o suporte para o desenvolvimento do seu próprio teste.
Comparativo das técnicas
ERA | LAMP | PCR | qPCR | |
Temperatura da Reação | 37-42°C | 65°C | 95-55°C | 95-55°C |
Tempo da Reação | 5-20 min | 45-60 min | 1,5h | 2h |
Sensibilidade | Alta | Alta | Moderada | Alta |
Operação | Simples | Simples | Complexa, necessita de profissionais treinados | Complexa, necessita de profissionais treinados |
Precisão | Alta | Frequentemente falsos positivos | Facilmente contaminada por aerossóis | Alta |
Custo | Moderado | Alto | Moderado | Moderado a alto |
Equipamento Necessário | Fluorímetro de temperatura constante | Fluorímetro de temperatura constante | Termociclador PCR, equipamento de eletroforese, leitor de gel | Termociclador qPCR em tempo real |
Princiapais Vantagens
Rápido e Fácil de Operar
Resultados em 15 minutos
Alta sensibilidade
capaz de detectar de 1-10 cópias.
Resistente a Inibidores
Preparação simples da amostra antes da reação.
Amplificação isotérmica 35-45ºC
Compátivel com diversos equipamentos
